周广青1,2, 刘晓庆2, 史喜绢1,2, 杨大鹏1, 袁莉刚1*, 常惠芸2*
(1. 甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046)
【目的】口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄动物易感的一种急性、热性、高度接触性传染病。本研究利用链霉亲和素(SA)和生物素的高亲和力，建立了更快捷的液相阻断ELISA(LPBE)检测方法。将SA标记抗体，使SA-HRP更易被捕获，整体提升了LPBE的灵敏度，进而减少了反应所需时间。结果表明，SA-LPBE在实现更快速检测的同时，还保持了传统LPBE的准确性。因此该项工作为口蹄疫的诊断与防控提供了快速简便的免疫学检测方法。
【方法】通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE)，在猪，牛、羊血清样品中具有较高的符合率。
【结果】结合实际情况，判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128，猪血清效价≥64时，判定为阳性，与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析，与原试剂盒具有92.3%的符合率，其批内变异系数 < 5%，批间变异系数 < 10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线，根本上提高了酶促反应的效率，保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性；利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h，解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。
【结论】基于生物素标记抗体技术和HRP-SA，建立了一种新的快速检测口蹄疫病毒抗体的ELISA方法(SA-ELISA)。该方法适用于FMDV免疫抗体监测、疫苗免疫效果评估、流行病学调查和免疫指导的持续技术支持。