孙雯叶1,2, 李建基1,2, 王亨1,2, 董俊升1,2, 李俊1,2, 崔璐莹1,2*
(1. 扬州大学兽医学院 江苏省重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009;2. 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室, 扬州 225009)
【目的】甲硫脑啡肽(MENK) 作为一种内源性阿片肽，是由前脑啡肽(PENK)衍生而来的脑啡肽的一种，参与调控细胞增殖，在生殖系统中也存在MENK及其受体。大肠杆菌是导致反刍动物产后子宫感染的主要病原微生物之一，其主要通过脂多糖(LPS)发挥致病作用。本实验室的前期研究表明，MENK可促进LPS作用下的奶牛子宫内膜基质细胞(BESC)增殖，但其具体的作用机制尚无报道。本研究利用Nx、ICI 154129和CTAP这些阿片受体拮抗剂，旨在阐明MENK对BESC增殖作用的潜在作用机制。
【方法】本研究使用的阿片受体拮抗剂包括非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮(Nx)、δ阿片受体拮抗剂ICI 154129和μ阿片受体拮抗剂CTAP，分组情况：空白对照组，LPS处理组，LPS与MENK(10-10mol·L-1)共处理组(LM组)，LPS、MENK和阿片受体拮抗剂(Nx、CTAP和ICI 154129，均为10-10mol·L-1)共处理组以及LPS与阿片受体拮抗剂共处理组。检测细胞活性、细胞周期、细胞增殖相关因子基因表达以及Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路变化。
【结果】阿片受体拮抗剂单独或与LPS共处理细胞24 h，对细胞活力无影响(P>0.05)。与LM组相比，LPS、MENK和Nx共处理组(LMN组)以及LPS、MENK和ICI 154129共处理组(LMI组)的G1期相对细胞数升高(P<0.05)，LMN组以及LPS、MENK和CTAP共处理组(LMC组)S期相对细胞数降低(P<0.05)。与LM组相比，LMN组和LMI组细胞CCN2、TGFB1和TGFB3基因表达下调(P<0.01)，LMC组细胞CCN2基因表达下调(P<0.01)。与LM组相比，LMN组cyclinD1和GSK-3β蛋白表达上调(P < 0.05)，LMI组细胞β-catenin和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.01)，LMC组细胞cyclinD1蛋白表达上调(P<0.05)；与LM组相比，LMN组、LMI组和LMC组AKT磷酸化水平升高(P<0.05)。
【结论】Nx可以拮抗阿片受体，同时可能通过受体非依赖途径发挥抑炎作用，促进细胞增殖；MENK促进细胞增殖可能是通过DOR和MOR介导的。但ICI 154129对细胞增殖的抑制作用机制尚不明确，值得进一步深入探究。